本篇回應
Apa 認為 含有正確訊息
引用自 Apa 查核回應
與衛生福利部疾病管制署檢驗及疫苗研製中心之SARS-CoV-2 病毒核酸檢測文件內容大致相符。
內文找新病毒株(基因定序)的部分:近期感染事件將不再基因定序,使資源用在刀口上。

資料佐證

SARS-CoV-2 病毒核酸檢測:
https://www.cdc.gov.tw/En/File/Get/cQ8FwaQ-2Hq1qwgxSId0NQ

2021/5/15 14:00 中央流行疫情指揮中心嚴重特殊傳染性肺炎記者會 24:01
此查核回應尚被用於以下的可疑訊息
《這天,我與病毒為伍》

👁找到呼吸道病毒🦠的基因體🧬有多難呢?

說穿了 也不是很難
比驗孕稍微難一點而已

🫁從肺部支氣管的相關位置採樣(例如鼻腔後)
或是肺部組織(動物才會這樣做)

加入Trizol reagent 💀💀把組織分解後
以1/5的比例加入 chloroform 💀💀

搖勻呈現乳糜狀後 🧪🧪
13500g 攝氏4度 離心15分鐘後
呈現三層分離(如最後一張圖)

最後非常仔細小心地取出上層透明的部分

再加入等體積的 isopropanol ⚗️

搖勻後 攝氏四度靜置五分鐘

13500g離心十分鐘
得到沉澱物 即為total RNA sample🧬🧬
(包括環境細菌的、你身體的、病毒的以及死細胞的)

為了去除殘留的isopropanol,chloroform
需加入 75% 乙醇(in DEPC-double_Distilled water , ddH2O)
並搖晃使沈澱物飄起
再以13500g攝氏四度 離心五分鐘
(重複上述步驟兩次)
最後風乾後 以DEPC-ddH2O回溶⚱️⚱️

最後在nano-drop測定RNA concentration
(一個sample大概五十分鐘
當sample量變成16個時 會變成1.5小時)

為何是 16個? 🏇🏻🏇🏻
別急, 慢慢看完。
(如果你不耐煩了....你知道有多麻煩了嗎?)
😁😁😁
——————-

由於RNA sample 是各種奇怪RNA🔭🔭
又怕殘留DNA
所以必須事先加入 DNase-I 去除DNA

並為了避免RNA損壞 要額外加入 RNase inhibitors

隨後~
我們將RNA 以 反轉錄的方式 變成互補DNA( complementary DNA)

約需要200 ng~1000ng 的總RNA
歷經一個小時的Reverse transcriptase PCR的努力 將RNA全部變成cDNA🪣🪣

再將cDNA 稀釋成 5~15 ng/ul
(你沒看錯~ 就是 千分之一毫升)🩸

最後把 cDNA樣品放入 第一張圖的白盤中
白盤在共有96格(約12*8公分)

接著 與 病毒基因體的引子(primer)🧬
與SYBR-green(螢光探針-🔮聚合酶複合物)混合

總體積約10~20 ul

所以他的滴管也非常的小(如第二張圖)

之後 需要1.5小時的時間 進行35~40重複的PCR program

————————-
為什麼是 16個樣品呢?

96格 一個樣品需要三重複
所以剩下32個樣品

一個樣品需要一個基因陽性對照組(你身上一定會有的基因,通常是B-actin ,GAPDH,alpha-tubulin...)
所以就剩下16個

這時候... 手套已經戴了一個下午
手已經爛了(如第三張圖)

終於可以坐下了....?

沒有...因為還有成千上百個待測樣品🛎🛎🛎
—————————

而得到的數據最重要的就是Ct 值🧲🧲🧲🧲

Ct( threshold cycle number)
意思是 cDNA被酵素放大的次數

而在某次的放大過程中
螢光的亮度被機器偵測到

亦即樣品中的目標基因量很足夠
此數值可視為間接代表基因的表現量
因此視為病毒感染指標💣💣💣💣

又因為每次挖到的樣品不同
或是下樣的誤差

我們必須將你身上最穩定出現的基因Ct
與病毒基因的Ct
做一次 deltaCt(這裡就是 數據常用的水平校正)⚒⚒

到這裡就會知道不同病毒基因的表現差異
🗿🗿🗿🗿

——————————

為何找到新病毒株這麼慢?🤢🤢

分離病毒株需要藉由許多分層離心的梯度
最常使用的是sucrose-gradient 或是 CsCl-gradient 並使用超高速離心(約 180000g)
(我沒有多打一個0,他就是十八萬g)

分出來的每一個濃度梯度 都可以做一次樣品的採樣

要怎麼找到他呢?👐🏽👐🏽👐🏽

我們要在一個約0.3cm的銅網上(如第四張圖)
你沒看錯 就是中間那顆小水滴🩸🩸
將病毒樣品放在上面 烘乾一天
如果病毒太小就得用UA(Uranyl Acetate) 做染色🪆🪆

之後以穿透式電子顯微鏡(TEM)
在銅網中的300個洞中
找到病毒

知道敵人是誰後....

再進行蛋白質晶體繞射
找到推測的蛋白質結構

進行基因定序😾

才能告訴你 那是誰🙀

—————
如果你看完了

謝謝你

因為你知道為什麼這麼慢了

沒看完-沒關係
因為你永遠不會懂我們多無奈

檢驗人員的大拇指加一次樣品要按96次
一個樣品有三種東西
總共要按288次

比較有錢的實驗室會有 八爪 十二抓
省去時間

你的大拇指能動幾次不累呢?

在0.3公分-300洞裡找病毒
在12*8的盤子上下樣品

在一天內要重複這件事 至少10次

下班回家還要看新聞被你們罵 驗太慢
💩💩💩

台灣人,我打的流程 你是不是看不懂?

對,那請你乖乖在家
除了別亂跑
記得給我們一點鼓勵
不要以為你都懂

其實你知道的真的比你想像的還少。

而人本來就不會什麼都懂
每個專長都值得被尊敬

你也希望你被尊敬
當然我們也需要

不然你動一下手指就好
分享出去... 戰場上的士兵 需要被知道

以上內容「Cofacts 真的假的」訊息回報機器人與查證協作社群提供,以 CC授權 姓名標示-相同方式分享 4.0 (CC BY-SA 4.0) 釋出,於後續重製或散布時,原社群顯名及每一則查證的出處連結皆必須被完整引用。